Il kit di amplificazione rapida isotermica del DNA Mira utilizza una tecnologia di amplificazione dell'acido nucleico avanzata sia a temperatura ambiente che a una temperatura costante (in genere da 39 ° C a 42 ° C). Con l'assistenza di proteine ausiliarie e proteine di legame a singolo filamento, la ricombinasi e i primer formano un complesso che cerca e si lega al dominio di omologia target. Ciò si traduce nella formazione di una regione del loop D nel sito omologa, iniziando lo scambio di fili. Poiché la ricombinasi si dissocia dal complesso, la polimerasi si lega all'estremità 3 'del primer, iniziando il processo di estensione della catena. Inoltre, sfruttando l'attività dell'esonucleasi, il kit utilizza singoli sonde molecolari progettate per il modello, consentendo il monitoraggio in tempo reale del processo di amplificazione del frammento target tramite apparecchiature di rilevamento della fluorescenza.
【Caratteristiche】
Elevata sensibilità
Il kit offre eccezionali sensibilità e specificità per l'amplificazione dell'acido nucleico.
Tempo di reazione rapido
Il processo di amplificazione dura solo 20 minuti, fornendo risultati rapidi.
Comodo spazio di archiviazione e maneggevolezza
I componenti di reazione sono in polvere secca, facili da conservare e maneggiare.
Ampia compatibilità
Compatibile con vari strumenti PCR quantitativi di fluorescenza, sistemi di amplificazione della fluorescenza a temperatura costante.
【Design di primer】
Per prestazioni ottimali, i primer dovrebbero essere di lunghezza 30-35 bp. I primer brevi possono ridurre la velocità di amplificazione e la sensibilità al rilevamento. I progetti di primer dovrebbero evitare strutture secondarie che potrebbero impedire l'amplificazione. La lunghezza dell'amplicone consigliata è 150-300 bp.
【Design della sonda fluorescente】
La sonda fluorescente non deve sovrapporsi al sito specifico di riconoscimento del primer. Dovrebbe essere 46-52 nt di lunghezza, evitando sequenze palindromiche, strutture secondarie interne e basi ripetute continue. Il design della sonda include quattro siti di modifica:
- A dspacer(tetrahydrofuran, thf) a circa 30-35 nt dall'estremità 5 ', fungendo da sito di riconoscimento per esonucleasi.
- A gruppo fluorescenteè etichettato a monte del sito THF.
- A gruppo di spegnimentoè posizionato a valle, 2-4 nt a parte il gruppo fluorescente.
- L'estremità 3 'della sonda è etichettata con agruppo bloccante(EG, un gruppo di ammina, gruppo fosfato o C 3-), con THF a circa 15 nt di distanza dall'estremità 3 '.
【Composizione del kit】
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Composizione |
COcnt |
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Un buffer |
1,6 ml × 1tube |
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Tampone b |
150μL × 1Tube |
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PModello di controllo oscitivo |
100μl × 1tube |
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PControllo osatosonda eprimer Mix |
70μL × 1Tube |
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Reagente |
48T |
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Manuale di guida |
1Copia |
【Specifiche di imballaggio】
- Specifiche: 48 T/pacchetto
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